Cell Signaling Technology

SimpleChIP® 技术支持

注释: 为最大程度的保证实验结果,我们推荐客户严格遵循CST的实验操作方法 ,这些实验方法经过CST科学家的反复验证,能够保证实验结果的精确性和可重复性!

为了确保能够得到及时的解决方案,当你与我们取得联系时,请准备好以下信息。技术支持,请拨打免费电话: 4006-473287,邮件:tech@ cst-c.com.cn

常见问题

  1. 产品目录号(CHIP试剂盒/或者抗体)。

  2. 批号和印刷在试管上的参考日期。

核染色质

  1. 列出细胞类型和所使用的处理方法。黏附细胞还是悬浮细胞?
  2. 给出在染色质的准备中所用到的细胞数量,并解释这些细胞数量是如何确定的。
  3. 固定时间和甲醛浓度。
  4. 提供核酸酶的消化条件(时间,温度,添加的核酸酶的总量,消化反应的总体积)
  5. 颗粒在1x ChIP缓冲液溶解后在冰上放置的时间。
  6. 提供超声处理的条件(脉冲的数量,每个脉冲的超声处理时间,和脉冲间隔时间)。
  7. 超声处理的模型(包括探头的型号和超声处理的相关设置)。

  8. 纯化的染色质DNA样品的浓度(参照实验方法的B部分)。

染色质免疫沉淀

  1. 列举出免疫共沉淀所使用抗体。提供每个免疫共沉淀反应所使用的抗体数量(μg 或者μl),抗体的来源,抗体是否已经验证适合于IP或者CHIP实验。
  2. 添加到每个IP实验的染色质的数量(μg)。
  3. 抗体和染色质的培养时间。
  4. 在G beads中所使用的蛋白类型(磁珠或者琼脂糖)。
  5. 和珠子的孵育时间。
  6. 洗脱条件(时间和温度)。
  7. 解交联的条件(时间和温度)。

IP浓缩的检测和定量

  1. 定量的方法(标准PCR,定量PCR,CHIP-on-chip,CHIP测序)。
  2. PCR的循环数和目的DNA位点的检测。
  3. 2%的总DNA经过一系列的连续稀释后,是否进行了PCR分析(在G部分,步骤1有描述)?
  4. 使用这个引物进行一系列连续稀释DNA的PCR 是否是线性的?
  5. 使用所选定的引物,估算出来的PCR的有效性是多少(仅针对定量PCR使用者)?

  6. 组蛋白H3抗体(#4620) 对照是否浓缩了对照RPL30启动子的DNA?如果有的话,百分之一的总染色质添加到IP反应中,浓缩的数量为多少?
  7. 使用正常兔子IgG (#2729) 浓缩RPL30启动子的DNA,百分之一总染色质的数量是多少?
  8. 组蛋白H3抗体(#4620)对照是否浓缩了目标位点的DNA?如果是的话,百分之一的总染色质,它的浓缩数量是多少?
  9. 使用正常兔子IgG (#2729) 浓缩目标位点的DNA,百分之一总染色质的数量是多少?
  10. 测试抗体是否浓缩了目标位点的DNA。如果有,百分之一的总染色质的数量是多少?

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