Cell Signaling Technology

荧光Western

注释: 为最大程度的保证实验结果,我们推荐客户严格遵循CST的实验操作方法 ,这些实验方法经过CST科学家的反复验证,能够保证实验结果的精确性和可重复性!

使用荧光偶联的二抗进行免疫印迹能得到更准确的定量,使用来自不同种属的一抗还可进行双色印迹。在同一张膜上可以同时检测磷酸化蛋白和总蛋白,自然地可检测不同分子量的不同目标蛋白的调控情况。但需要记住的是,一抗的亲和力不同,没有两个单独的抗体可直接相互比较,但必须标准化。在某些情况下,荧光检测可能不如化学发光检测敏感,因此可能不适于低表达水平的蛋白。荧光Western检测需要专门的仪器,如荧光成像仪。

 

Western blot analysis of COS cells extracts.

免疫印迹分析COS细胞提取物,未经处理或U0126 (#9903) (10μM,1小时)或TPA (#4174)(200nM,10分钟)处理,使用的抗体是Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (D13.14.4E) XP? Rabbit mAb(#4370)和P44/42 MAPK(ERK1 / 2)(3A7)Mouse mAb (#9107).

Western blot analysis of Raw264.7 cells extracts.

免疫印迹分析Raw264.7细胞的提取物,未经处理或LPS处理(1ug/ml,6小时),使用的抗体是iNOS Antibody (#2977).


CST 提供修改后的荧光免疫印迹的操作步骤。我们发现,在封闭过程中省略吐温-20是唯一必要的显著变化。欲知全部细节,请查看 荧光免疫印迹操作步骤(在BSA中孵育一抗) and our Fluorescent Western Immunoblotting Protocol (Primary Ab Incubation In Milk)。此外,我们的 预染蛋白Marker,宽分子量Marker(预混格式)#7720 在近红外波长中具有自发荧光。

双色免疫印迹要求一抗来自不同的物种和适当的不同染料标记的二抗。如果一抗需要不同的孵育缓冲液,每个抗体应单独在两个缓冲液中进行测试,以确定双标记实验的最优缓冲液。由于重叠的抗原决定簇,由一抗和/或二抗引起的干扰,一抗孵育缓冲液不匹配等,一些抗体对可能无法一起工作。

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