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REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
使用与人 RCAS1 蛋白中 Gly147 周围残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
在 SiSo 细胞中表达的受体结合癌抗原 (RCAS1) 也称雌激素受体结合片段相关基因 9 (EBAG9)。RCAS1 最初被发现是一种雌激素诱导基因 (1),目前发现通过负向调控细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 的细胞毒性在适应性免疫应答中发挥新的作用 (2)。RCAS1 在种系发生中较保守,但在多数人组织和细胞中普遍表达 (3,4)。有证据表明,RCAS1 在胃肠道癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌及宫颈癌等多种恶性肿瘤组织中表达水平升高。研究表明,RCAS1 组织表达水平与上述恶性肿瘤患者的预后呈负相关 (4)。还值得注意的是,研究还检测到这些癌症患者的血清中 RCAS1 水平升高 (4)。初步研究表明,癌细胞会分泌 RCAS1,并且 RCAS1 可作为在 NK 细胞、T 和 B 淋巴细胞中表达的假定受体的配体而发挥作用,从而诱发凋亡,使得癌细胞避开免疫监视 (5,6)。后续研究发现 RCAS1 是一个 III 型跨膜高尔基体蛋白,能调控囊泡形成、分泌和蛋白糖基化 (2,7-9)。实际上,研究表明通过负向调控从反式高尔基体转运蛋白到分泌溶酶体,RCAS1 过表达可负向调控 CTL 的细胞溶解功能 (2)。此外,RCAS1 过表达会延迟囊泡从内质网到高尔基体的转运,并使内质网质量控制组分和糖基化分子组定位错误。因此,RCAS1 会诱导肿瘤相关聚糖抗原在细胞表面沉积,这被认为可通过介导黏附、浸润和转移导致肿瘤发生 (8,9)。
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