Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
86653S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M R Mk |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠, 猴
使用与 Lys120 被单泛素化的人组蛋白 H2B 的羧基末端相对应的合成肽,,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
核小体由四个核心组蛋白(H2A、H2B、H3 和 H4)组成,它是染色质的主要成分。组蛋白最初被认为是作为 DNA 包装的静态支架蛋白起作用,但现在已被证明是一种经过多种类型翻译后修饰的动态蛋白,包括乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化 (1)。泛素是一种保守的 76 氨基酸肽单元,能通过泛素化过程共价连接多个细胞蛋白。这个蛋白-泛素接合过程涉及三种组分。首先,泛素通过与激活组分 E1 形成一种硫酯复合体而被激活;激活的泛素继而转运至泛素载体蛋白 E2,然后从 E2 转运到泛素连接酶 E3,最后从 E3 转运到靶标蛋白赖氨酸残基的 ε-NH2 (2)。在转录激活期间,RAD6 E2 蛋白和 BRE1A/BRE1B E3 连接酶(也称为 RNF20/RNF40)在赖氨酸 120 上单泛素化组蛋白 H2B (3)。在激活期间,RAD6/BRE1 复合体被 PAF 复合体募集到基因启动子,PAF 复合体是一种调节转录延伸的 RNA 聚合酶 II 结合蛋白复合体 (3-5)。单泛素化的组蛋白 H2B 赖氨酸 120 与活化基因的转录区域结合 (3,6)。单泛素化的组蛋白 H2B 通过促进 FACT 依赖性染色质重构刺激转录延伸 (7,8)。此外,它对于随后的组蛋白 H3 赖氨酸的甲基化 4 以及 79 另外两种调节转录起始和延伸的组蛋白修饰非常重要 (9)。有趣的是,USP22(人 SAGA 组蛋白乙酰转移酶复合体的亚基)对组蛋白 H2B 赖氨酸 120 的去泛素化是转录激活的一个必需步骤 (10)。因此,在转录期间,组蛋白 H2B 的泛素化是动态的,可以作为转录激活的一个中间步骤。
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