Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
16606S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠
大鼠, 仓鼠 , 猪 , 马, 豚鼠
使用与人 ERG 蛋白的羧基末端附近残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
ETS 相关基因 (ERG) 是序列特异性 DNA 结合转录因子的 E-26 转化特异性 (ETS) 家族成员 (1)。ERG 在脊椎动物发育中发挥着重要且高度保守的作用。在胚胎发育早期,ERG 在胚胎中胚叶和内皮中高度表达,并在血管系统形成、泌尿生殖道形成和骨发育中发挥着重要作用 (2,3)。在胚胎发育晚期,ERG 发挥作用且调节造血干细胞多能性、内皮细胞稳态和血管生成 (2,4-7)。ERG 表达不只限于发育。在成年小鼠中,ERG 正常情况下在内皮组织(包括肾上腺内皮、软骨内皮、心脏内皮、脾脏内皮、淋巴内皮)和嗜酸性粒细胞中表达 (8)。但是,ERG 活性的控制解除(经常因染色体重排所致)与多种不同癌症的预后不良相关。这种染色体易位已经在 5-10% 的 Ewing 肉瘤(一种侵袭性骨肿瘤和软组织肿瘤)中鉴定,其可产生 EWS/ERG 嵌合蛋白,且这种嵌合蛋白由 Ewing 肉瘤断点区 1 的氨基末端反式激活结构域 (EWS) 和 ERG 的羧基末端 ETS 结构域组成 (9)。ERG 和 TLS/FUS 或 ERG 和 ELF4 之间的染色体易位与急性髓性白血病相关 (10, 11)。由 TMPRSS2 基因的雄激素驱动型启动子发生基因融合而产生的 ERG 过表达,已经被鉴定为前列腺癌中转移和不良预后标志的关键驱动力 (12)。
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