Cat. # | Size | Price | Inventory |
---|---|---|---|
14201S | 100 µl (50 tests) |
REACTIVITY | H M |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠
使用与人 NFAT1 蛋白 Gly87 周围的残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
NFAT(活化型 T 细胞的核因子)蛋白家族包含 NFAT1(NFATc2 或 NFATp)、NFAT2(NFATc1 或 NFATc)、NFAT3 (NFATc4) 和 NFAT4(NFATc3 或 NFATx)。该家族的所有成员均是含有一个 Rel 同源性结构域的转录因子,可与 AP-1 (Jun/Fos) 协作调节基因转录,协调有效的免疫应答 (1,2)。NFAT 蛋白主要在免疫系统细胞中表达,但也在骨骼肌、角化细胞和脂肪细胞中表达,调节这些细胞中的细胞分化程序 (3)。在静息细胞中,NFAT 蛋白高度磷酸化,并定位于细胞浆中。胞内钙浓度升高会激活钙/钙调素依赖性丝氨酸磷酸酶钙调磷酸酶,后者使 NFAT 蛋白去磷酸化,从而导致这些蛋白质随后转位到细胞核 (2)。当钙浓度降低且激酶(如 GSK-3 或 CK1)对 NFAT 的磷酸化减弱时,出现 NFAT 信号转导终止 (3,4)。Cyclosporin A 和 FK506 是可抑制钙调磷酸酶并将 NFAT 蛋白保留在细胞浆中的免疫抑制药物 (5)。
探索与本品相关的通路。
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