REACTIVITY | H M R |
SENSITIVITY | Endogenous |
MW (kDa) | |
Source/Isotype | Rabbit IgG |
Product Information
Application | Dilution |
---|---|
Flow Cytometry (Fixed/Permeabilized) | 1:50 |
All reagents required for this protocol may be efficiently purchased together in our Intracellular Flow Cytometry Kit (Methanol) #13593, or individually using the catalog numbers listed below.
NOTE: Prepare solutions with reverse osmosis deionized (RODI) or equivalent grade water.
NOTE: When including fluorescent cellular dyes in your experiment (including viability dyes, DNA dyes, etc.), please refer to the dye product page for the recommended protocol. Visit www.cellsignal.com for a full listing of cellular dyes validated for use in flow cytometry.
NOTE: Adherent cells or tissue should be dissociated and in single-cell suspension prior to fixation.
NOTE: Optimal centrifugation conditions will vary depending upon cell type and reagent volume. Generally, 150-300g for 1-5 minutes will be sufficient to pellet the cells.
NOTE: If using whole blood, lyse red blood cells and wash by centrifugation prior to fixation.
NOTE: Antibodies targeting CD markers or other extracellular proteins may be added prior to fixation if the epitope is disrupted by formaldehyde and/or methanol. The antibodies will remain bound to the target of interest during the fixation and permeabilization process. However, note that some fluorophores (including PE and APC) are damaged by methanol and thus should not be added prior to permeabilization. Conduct a small-scale experiment if you are unsure.
NOTE: Count cells using a hemocytometer or alternative method.
posted July 2009
revised June 2020
实验步骤编号:407
人, 小鼠, 大鼠
犬 , 猪
使用与 c-Myc 蛋白中氨基末端残基相对应的合成肽,对动物进行免疫接种来产生单克隆抗体。
Myc/Max/Mad 网络成员可作为转录调节分子,在增殖、分化和凋亡等多种细胞行为方面发挥作用 (1)。这些蛋白质均有一个共同的基础螺旋-环-螺旋亮氨酸拉链 (bHLH-ZIP) 基序,这是二聚化和 DNA 结合所需的。Max 最初是因其与 c-Myc 的相互作用能力而被发现,并发现其为 Myc 蛋白与 DNA 结合和激活转录过程所必需 (2)。随后,Max 一直被视为转录网络的核心组分,并与 Myc 和 Mad 家族其他成员形成同型二聚体和异二聚体 (1)。Max 与 Myc 或 Mad 的相互作用对转录调控和细胞行为可能有相反的作用 (1)。Mad 家族包括四个相关的蛋白质;Mad1、Mad2 (Mxi1)、Mad3 和 Mad4,以及 bHLH-ZIP 家族最不相关的成员 Mnt 和 Mga。与 Myc 一样,Mad 蛋白由短半衰期严格调控。在一般情况下,Mad 家族成员通过抑制转录干扰 Myc 蛋白介导的过程,如增殖、转录和抑制细胞凋亡 (3,4)。
探索与本品相关的通路。
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